細胞劃痕實驗(Wound Healing Assay)是體外模擬傷口愈合過程，快速評估貼壁細胞遷移運動能力的經典基礎實驗，操作簡便無需特殊設備，廣泛用于藥物、基因干預對腫瘤轉移、上皮修復等過程的遷移影響研究。
 

　　實驗前準備：
 

　　‌核心材料‌：處于對數生長期的目標貼壁細胞、培養基、無血清/低血清培養基、無菌DPBS緩沖液、200μl無菌槍頭、6孔板、直尺、馬克筆、帶拍照功能的倒置顯微鏡。
 

　　‌環境預處理‌：超凈臺提前開啟紫外燈照射30分鐘完成滅菌，所有操作全程在無菌環境下進行，避免細胞污染。
 

　　細胞劃痕實驗標準操作步驟：

 

　　‌孔板預標記‌：用馬克筆在6孔板底部，借助直尺每隔0.5~1cm畫一道均勻橫線，每孔至少穿過5條線，后續劃痕與橫線垂直相交，這些交叉點就是后續固定拍照的定位點，解決不同時間點找不到同一視野的問題。
 

　　‌細胞鋪板‌：消化細胞并充分吹打成單細胞懸液，調整接種密度，確保過夜培養后細胞能100%融合形成均勻單層，無空洞、無局部細胞堆積。
 

　　‌制造標準化劃痕‌：棄去原有培養基，將無菌槍頭緊貼直尺，垂直于孔板底部的標記線勻速劃過細胞層，力度保持一致，只劃破細胞層不劃傷板底，每孔劃3~5條平行劃痕，保證初始劃痕寬度均勻。
 

　　‌清洗除雜‌：沿孔板壁緩慢加入預溫的無菌DPBS，輕柔沖洗2~3次，洗掉劃落的懸浮細胞碎片，避免殘留細胞后續貼壁造成“假愈合”，之后吸去DPBS，加入無血清或血清濃度<2%的新鮮培養基。
 

　　‌定點定時拍照‌：將孔板置于顯微鏡下，以0小時為初始時間點，在每個交叉點位置固定視野拍照記錄初始劃痕寬度；隨后將孔板放入37℃、5% CO?培養箱繼續培養，根據細胞遷移速度，在12h、24h、48h等預設時間點回到相同的視野位置再次拍照。